Evaluación de dos diluyentes para la conservación de semen canino bajo condiciones de refrigeración: Efectos del tiempo de refrigeración, grado de dilución y de la concentración de fructosa Evaluación de dos diluyentes para la conservación de semen canino bajo condiciones de refrigeración: Efectos del tiempo de refrigeración, grado de dilución y de la concentración de fructosa

Resumen

RESUMEN: El propósito del presente trabajo fue evaluar la utilización de dos diluyentes para la conservación de semen canino bajo condiciones de refrigeración,  estudiando los efec- tos del tiempo de almacenamien- to, el grado de dilución y los niveles de fructosa, sobre la movilidad, morfología e integridad acrosomal. Se utilizaron 5 machos adultos, sin raza  definida (SRD), con edades entre 3 y 6 años,  clínicamente sanos. Las muestras  se obtuvieron mediante manipulación digital del pene, colectando únicamente la segunda fracción del eyaculado. Cada alícuota fue diluida en proporción 1:2.,  1:4  ó 1:8  hasta  un volumen total  de 0,5  ml, empleando como diluyentes TRIS-ácido  cítrico- yema de huevo o TRIS - Citrato de Sodio - Yema de huevo, con 1,3 ó 1,6 g de fructosa. inicialmente las muestras fueron enfriadas gradualmente hasta 4 °C (1 °C /4 min.) y luego almacenadas  en una nevera convencional (4 ± 2 °C). La eva- luación del semen fue realizada antes de la dilución y a las 6, 12, 24,  48,  72  y 96  h de almacena- miento, determinando % movilidad masal,  % viabilidad espermática, anormalidades  morfológicas e integridad acrosomal; ésta última se evaluó mediante  microscopia  de contraste de fase. La movilidad fue evaluada  por observación directa al microscopio de una gota gruesa de semen y calificada en una escala de 1 a 4, siendo 4 el mayor grado de movilidad. A las seis horas de almacenamiento  no se observó diferencias significativas (p>0,05) entre  los diferentes   tratamientos. Posterior mente,  a  medida  que transcurrió  el tiempo, la movilidad espermática  disminuyó gradualmente, observándose los menores valores en el semen diluido en proporción 1:2; los efectos de la concentración de azúcar y del tipo de diluyente utilizado no fueron significantes. Por otra parte, los efectos del tiempo de almacenamiento sobre la morfología, viabilidad e integridad acrosomal, tampoco fueron significantes.

Palabras Clave:  Perro, conservación de gametos,  refrigeración  de semen, calidad seminal.

ABSTRACT: The aim  of  this  study  was  to evaluate the use of two extenders for conservation of chilled canine semen studying the effect of storage, dilution level and fructose levels as energy substrate  on the sperm motility,  morphology and acrosomal  integrity.  Five healthy adult  male dogs between 3 to 6 years  old without defined breed (SRD) were used. Semen samples were collected by digital manipulation  of penis, collecting only the  second fraction  of the ejaculate. Each aliquot was diluted in proportions 1:2, 1:4 or 1:8 until total  volume of 0.5  ml, using the extenders  TRIS- citric  acidegg yolk or TRISSodium citrateegg yolk, with 1,3 or 1,6 g of fructose. Initially,  the samples were cooled gradually until 4° C (1° C/4 min) and then storage  in conventional refrigerator (4 ± 2° C). The semen assessment was estimated  before dilution and at 6, 12,  24,  48,  72 and 96 h of storage, measuring % motility   gross,   %   sper matic viability, spermatozoa morphological  abnor malities   %  and acrosomal  integrity,  this last  was estimated  using phase  contrast microscopy. The motility was evaluated by direct observation to microscope of one semen gross drop and qualified in the scale of 1 to 4, being 4 the level bigger of motility. At the 6 h of storage no effect was noted significant difference (p>0,05) between the treatments different. Subsequently, along the time   the   motility   gradually decreased, to less values in diluted semen in ratio  1:2;  on the other hand, the effects of the time storage refrigeration on morphology, viability and acrosomal  integrity, neither were significant.

Words key: Dogs, gametes conservation, semen refrigeration, semen quality.